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浅析细胞体外培养的三大污染原因

发布日期: 2020-01-02
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细胞培养技术是离体方法中主要的一种,是从动物体内取出细胞,模拟体内的生理环境,在无菌、适温、丰富的营养条件下,使离体细胞生存、生长并维持结构和功能的一门技术。细胞实验是科学探究的基础,细胞实验服务可以提供包括细胞侵袭检测、细胞划痕检测以及细胞增殖实验等的研究。细胞体外培养实验对于科学研究至关重要,然而在细胞培养中,常会因为不适宜的环境条件以及不得当的操作导致细胞被污染。在细胞培养实验中如何避免污染是一项很重要的工作,现在我们来看一下细胞体外培养中常见的污染种类,以及避免方法。
1、外源性污染
外源性污染中应注意实验室内空气保持洁净,定期清扫、紫外消毒,操作者严格按照无菌操作进行。由于离体细胞对各种毒物都很敏感,所以细胞培养所用器材的清洗、消毒处理非常关键。
培养所用的物品器具要彻底清洗消毒,超净台的物品摆放要井然有序,避免反复烧烤已经高温灭菌的物品以及避免因细胞株种类过多而引起的细胞间交叉污染。细胞实验室的构建也是各个细胞实验服务公司必备的实验室,实验室需要配备CO2培养箱、超净工作台/生物安全柜、纯水系统以及液氮罐等设备,同时需要保证细胞实验室的干净与整洁。
2、支原体污染
支原体是一种没有细胞壁的原核生物,大多呈不规则球状或丝状,由于它的直径小(约为0.15-2 µm),而且形状灵活,所以能逃过实验室常用的滤膜。在光学显微镜下支原体不可见,对培养基的需求有限,一般不会引起培养物混浊,因此支原体像药物一般杀细胞于无形之中。细胞被支原体污染后,其生长繁殖和形态、代谢及功能、染色体及免疫细胞产量均会受到影响,支原体污染能够消耗营养物,促进代谢积累,导致PH改变,诱导或抑制细胞因子表达,并改变培养细胞的代谢、增殖特征以及形态。
据一些资料报道,支原体污染在细胞体外培养过程中发生率高达15%~80%。为了避免支原体污染的发生,对培养物进行常规的支原体检测非常重要,应严格按照细胞培养操作程序进行操作、确保适宜的环境条件、严格的无菌观念操作、定期清洁消毒、任何培养用液使用前均进行无菌检查、只引进来源可靠的细胞,同时一旦发现污染的细胞应灭活弃之避免进一步污染扩散。美迪西提供细胞实验服务,其生物部在分子生物学、细胞生物学、体外生物学和结构生物学领域有丰富广泛的经验。从最初的cDNA文库构建到药物设计,通过蛋白质纯化,结构测定和分析测定,提供一套完整的生物学服务。
3、霉菌污染
霉菌污染也是细胞培养过程中常见的一个问题,如果细胞被霉菌污染后,在低倍镜下可见乳白色的团状漂浮物,培养液无变化。高倍镜下可见明显的菌丝,细胞活力变差,生长速度明显变慢,甚至死亡。细胞被霉菌污染时,若非价值很高的珍贵细胞一般选择扔掉,且相关的容器也要做严格处理。有文献报道,低速离心法可去除细胞培养中的霉菌污染,不仅实验条件简单,能完全去除霉菌,且所用时间短.并能将不良反应降至最低程度。
亚博足彩细胞体外培养中常见的污染种类除了上述之外,还有真菌、病毒原虫等污染,不管是何种类型的污染,总之在细胞体外培养实验中,预防污染的方法是良好的细胞培养技巧和正确的态度。同时在体外细胞培养时,还需要主动避免细胞实验对人的影响。实验人员需要注意一些操作细节.如避免由于眼睛及皮肤长时间暴露在紫外线下造成的损伤,同时避免由于误照引起的电光性眼炎。紫外线灯在消毒时可产生刺激人体呼吸道黏膜的臭氧,臭氧过多时也会引起中毒反应,所以为避免损伤出现应使用无臭氧紫外线灯或在消毒完30分钟后再进入超净工作室操作。

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