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分子生物学实验

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分子生物学技术是科学研究的有力工具,是现代生物学发展的主要动力之一,是当今前沿领域不可或缺的组成。分子生物学技术被普遍应用,但操作要求精度高、过程十分枯燥,结果相对不确定,极大地耗费了科研人员的精力及时间。赫贝生物费时三年打造完整的分子生物学平台,提供专业的分子生物学外包服务,包括基因克隆、载体改造、RNA干扰、实时荧光定量PCR、免疫共沉淀、双荧光素酶基因报告、凝胶迁移实验、Western Blot、Northern Blot、SNP分型检测、甲基化检测、各类罕见样本的DNA、RNA与蛋白抽提及优化、基因芯片数据分析等,涵盖了从DNA到RNA到蛋白质的整个分子生物学研究过程。

 
荧光定量PCR(周期:2-3周)
 
实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光染料,利用荧光信号累积实时监测整个PCR过程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
 
Northern Blot印迹杂交检测(周期:2-4周)
 
Northern blot印迹杂交是DNA/RNA的杂交,它是一项用于检测特异性RNA的技术,RNA混合物首先按照它们的大小和相对分子量通过变性琼脂糖凝胶电泳加以分离,凝胶分离后的RNA通过southern印迹转移到尼龙膜或硝酸纤维素膜上,再与标记的探针进行杂交反应,通过杂交结果分析可以对转录表达进行定量或定性。赫贝Northern Blot服务,基于地高辛探针标记,相对于同位素和生物素探针,具有无污染、信噪比适中,背景低等优点,公司Norther Blot服务平台对外开放以来,陆续解决了RNA抽提、样品处理、探针设计与标记等技术难题,实验水平大幅提高,实验成功率也趋于稳定,过去的一年中,赫贝生物帮助客户检测了动物细胞、组织、植物组织、血液样本,成功帮助客户发表多篇文章。
 
SNP分型技术服务(周期:2-4周)
 
单核苷酸多态性single nucleotide polymorphism(SNP),个体间基因组DNA序列同一位置单个核苷酸变异(替代、插入或缺失)所引起的多态性。 不同物种、个体基因组DNA序列同一位置上的单个核苷酸存在差别的现象。这种差别的基因座,DNA序列等可作为基因组作图的标志。人基因组上平均约每1000个核苷酸即可能出现1个单核苷酸多态性的变化,其中有些单核苷酸多态性可能与疾病有关,但也可能大多数与疾病无关。单核苷酸多态性是研究人类家族和动植物品系遗传变异的重要依据。
 
EMSA 凝胶/电泳迁移率实验(周期:2-4周)
 
EMSA实验的原理是基于DNA结合蛋白与DNA的特异性结合,依据实验需要,设计标记探针、非标记探针、蛋白特异性抗体等参照物,通过电泳迁移率的变化来进行定性和定量分析,赫贝提供的EMSA实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay 凝胶/电泳迁移率实验)基于生物素标记探针与对应的DNA结合蛋白的特异性结合,设计合理、科学的实验方案,为客户提供验证性的EMSA,竞争性的EMSA以及超迁移EMSA(Super-shift EMSA)实验服务。
 
核酸提取与纯化技术服务(周期:2-3周)
 
从细胞中提取基因组DNA和总RNA后,仍混杂着蛋白质、多糖和各种大小分子核酸同类物。除去这些“杂质”的过程,也就是核酸提纯过程。在核酸的分离纯化时,为防止核酸大分子的变性降解,必须在0~4℃的低温条件下操作。核酸酶的水解作用,是过去制备具有活性核酸大分子的严重障碍,现普遍采用加入去污剂或加入EDTA、8-羟基喹啉、柠檬酸钠以除去核酸酶的激活剂Mg2+,就可以抑制核酸酶的活性,保证在提纯过程中核酸大分子的完整。
赫贝可以从多种材料中提取基因组DNA和总RNA,由于不同种类的材料中提取的基因组DNA和总RNA量不同,甚至是新鲜程度不同的同一种材料,差异也比较大。
 
质粒抽提技术服务(周期:2-3周)                                          
 
质粒DNA质粒(plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒作为低等生物体内的最小遗传单位,具有分子量小、复制速度快等诸多优点,是分子生物学实验中不可缺少的工具载体。赫贝按照客户需求,可以提供多种类型的质粒DNA抽提服务,制备的质粒DNA没有RNA的污染,内毒素可低于50EU/mg,蛋白质小于3ug/mg质粒DNA,基因组DNA小于10ng/mg质粒DNA,OD260/OD280介于1.85-1.90之间,满足您的不同实验需要。
 
载体构建(周期:3-4周)
 
载体构建是分子生物学研究常用的手段之一。但由于影响因素较多,对研究者经验要求较高,因而往往费时费力。赫贝依托自身强有力的技术服务平台,可为客户提供高效、快捷的载体构建服务。可构建的载体包括:原核表达载体、真核表达载体、shRNA/microRNA载体、病毒载体等。
 
RT-PCR反转录服务 (周期:2-4周)                                       
 
在进行目的蛋白的表达、构建表达载体等实验时,通常需要获得一段目的基因。我们可以根据您提供的已知参考序列(NCBI上已发表),以基因组DNA或总RNA为模板,获取您所需要的某个区域的一段基因。
 
定点突变服务 (周期:2-4周)                                            
 
定点突变是分子生物学研究的核心技术,能够促进多个领域的研究,包括基因调控元件、DNA-蛋白相关作用、蛋白结构/功能关系、酶活中心及新型蛋白的研究。赫贝的定点突变服务运用了先进的基因合成技术和高保真聚合酶,能够提供点突变、缺失和插入等服务。
 
Western Blot(周期:2-3周)
 
蛋白质印迹(Western Blotting),是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品的某种蛋白表达情况的方法。该方法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种常规技术。常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。
 
双荧光素酶报告基因服务(周期:6-10周)
 
报告基因系统(Reporter Assay System)是现代分子生物学研究领域中分析结构基因旁侧区域潜在的顺式元件(如启动子、增强子和沉默子等)和反式作用因子相互作用关系的一种重要工具,它具有便捷、可靠、灵敏度高和适用于大规模检测等优点。同时,报告基因检测系统在功能基因组学研究、真核基因表达调控研究和相关药物或蛋白筛选工作中,有广泛的应用。报告基因的特点:全序列已测定或已被克隆;表达产物在受体细胞中本不存在,即无背景,在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物;其表达产物能进行定量测定。赫贝采用荧光素酶(Luciferase)和海肾荧光素酶(Renilla Luciferase)作为报告基因,研发出分别以哺乳动物真核载体和慢病毒载体为基础的报告基因载体系列。
 
染色质免疫共沉淀(CHIP)(周期:5-6周)
 
染色质免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的有力工具,利用该技术不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰以及转录因子与基因表达的关系。赫贝凭借先进的染色质免疫共沉淀技术平台,可为客户提供高质量的实验服务
 
DNA甲基化检测(周期3-4周)                                              
 
DNA甲基化研究是表观遗传学的重要内容,真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧啶,即在DNA甲基化转移酶的作用下使CpG二核苷酸5'-端的胞嘧啶转变为5'-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表达,去甲基化则诱导基因的重新活化和表达。这种DNA修饰的方式在脊椎动物的胚胎发育过程中起着重要的调控作用,参与多种疾病包括各种肿瘤的发病机理,是目前表观遗传学研究的热点。
 
病毒包装  (周期:6-8周)
 
赫贝提供多种高滴度高纯度的重组病毒包装研发外包服务,包括DNA整合型慢病毒和非整合型慢病毒(Lentivirus)、各种血清型的腺相关病毒(AAV)2/1,2/2,2/3,2/4,2/5,2/6,2/7,2/8,2/9)和腺病毒(Adenovirus)等。 
赫贝重组病毒研发外包中心提供病毒载体构建、扩增及纯化服务,包括了从实验设计到载体包装、生产、纯化、质量检定、分装等的一系列服务。建立了培养瓶(皿)、滚瓶、细胞发酵罐等培养细胞和扩增病毒的方法和工艺;建立了超滤和离子交换柱层析等多种纯化工艺方法;建立了系统的病毒载体质量控制和检定方法和流程。能够为基础研究、临床前研究和早期临床研究提供高滴度、高纯度的病毒载体。
 
其他服务项目
1、引物设计服务
2、基因合成服务
3、菌种鉴定服务
4、5'-RACE & 3'-RACE cDNA末端快速扩增服务
5、TA克隆服务
6、突变文库构建服务
 
服务内容:
动物模型复制:建有SPF级、清洁级动物实验室,可独立开展包括大小鼠、裸鼠、豚鼠、兔、比格犬、羊、小型猪等常见实验动物在内的动物造模(模型复制、活体成像、缺血再灌注、大鼠子宫内膜异位症模型、小型猪结石性脓肾模型、大鼠慢性肾衰模型、大鼠大部分肾切除慢性肾衰模型等)及相关实验(MRI、X光检测等),现已熟练掌握100余种不同类型动物模型的造模方法。
组织病理学检查:HE染色、特殊染色、免疫组化、免疫荧光、TUNEL、原位杂交、透射电镜、扫描电镜等
细胞生物学服务:原代细胞培养培养、细胞株、细胞转染、transwell、流式细胞仪检测、树突状细胞、干细胞培养、磁珠分选
分子生物学检测:CRISPR/Cas9基因敲除技术服务、荧光定量PCR、激光共聚焦检测、病毒载体构建及包装、SNP分型技术服务、EMSA 凝胶/电泳迁移率实验服务、载体构建、定点突变服务、染色质免疫共沉淀、双荧光素酶报告基因服务、WesternBlot、DNA甲基化检测等。


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